固定的目的在于保管細(xì)胞和組織的原有形態(tài)構(gòu)造,固定劑能阻止內(nèi)源性溶酶體酶對(duì)本身組織和細(xì)胞的自溶、抑止細(xì)菌和霉菌的生長(zhǎng)。固定劑經(jīng)過(guò)凝固、生成添加化合物等使蛋白質(zhì)內(nèi)部構(gòu)造發(fā)作改動(dòng),從而使酶失活。固定劑對(duì)細(xì)胞核細(xì)胞外成分發(fā)作物理改動(dòng)。未固定前活細(xì)胞被包裹在不能穿透的膜內(nèi),固定劑可以毀壞這一屏障,使大分子物質(zhì)穿透膜、逸出。選擇固定液對(duì)組織染色和免疫組化染色都極端重要,通常將幾種固定劑混合配制成復(fù)合固定液,這樣能夠順應(yīng)多種組織、細(xì)胞成分的保管,但是目前還沒有一種規(guī)范的固定液適用于一切的組織、細(xì)胞成分的保管。固定液主要分為醛類固定液、汞類固定液、醇類固定液、氧化劑類固定液、苦酸鹽類固定液等,較為常用的是醛類中的福爾馬林、醇類中的乙醇。 多聚甲醛溶液(4% PFA)主要由多聚甲醛、磷酸鹽、去離子水組成,pH 為7.4,該固定液合適于絕大多數(shù)組織和細(xì)胞的固定。4%多聚甲醛溶液是免疫組織化學(xué)和培育細(xì)胞固定中最常用的固定液之一,它能較好的維護(hù)組織和細(xì)胞的形態(tài)構(gòu)造以及核酸。
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